Fluoresenssielinaikamikroskoopille soveltuvat pH-herkät merkkiaineet
Tuomi, Kalle (2018)
Tuomi, Kalle
2018
Teknis-luonnontieteellinen
Teknis-luonnontieteellinen tiedekunta - Faculty of Natural Sciences
This publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.
Hyväksymispäivämäärä
2018-12-05
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:tty-201811142568
https://urn.fi/URN:NBN:fi:tty-201811142568
Tiivistelmä
Tässä työssä selvitetään Tampereen teknisen yliopiston kemian ja biotekniikan laitoksen tutkimusryhmälle fluoresenssin elinaika mikroskopiaan (FLIM) soveltuvia merkkiaineita. Vaatimuksina merkkiaineille on pH-herkkyys erityisesti solunsisäisellä pH alueella. FLIM -laitteiston osalta lisä vaatimuksina työlle tulevat mahdolliset fluoresoivan merkkiaineen viritysaallonpituudet: 375 nm, 405 nm, 483 nm ja 658 nm. Työn tavoitteena on siis löytää aiemmin sovellettuja merkkiaineita, jotka toimivat edellä mainituilla parametreillä. Fluoresoivia merkkiaineita on useita ja niitä käytetään monien eri parametrien määrittämiseen eri tarkoituksissa. Suurin osa käytetyistä fluoresoivista merkkiaineista soveltuu kuitenkin vain intensiteetin mittaamiseen perustuviin menetelmiin, mikä rajaa kyseiset merkkianeet pois työn tavoitteesta. pH-herkkien FLIM soveltuvien merkkiaineiden etsiminen suuresta artikkeli määrästä on hidasta. Löytyvien merkkiaineiden määrää rajaa myös käytettävät aallonpituudet.
Tässä työssä käydään läpi fluoresenssin teoriaa, fluoresoivien merkkiaineiden ja niiden rakennetta sekä toimintaa. Työssä selvitetään myös tarkemmin pH-herkkien merkkiaineiden ominaisuuksia ja käydään läpi aiempia sovelluksia. Teoriaosassa perehdytään aluksi fluoresenssin prosessiin, fluoresenssin elinaikaan ja miten ympäristö vaikuttaa fluoresenssiin. Fluoresoivissa merkkiaineissa käydään ensin läpi yleisesti merkkiaineiden ominaisuuksia ja syvennytään sitten työn kannalta olennaisten merkkiaineiden rakenteisiin. Lopuksi käydään läpi autofluoresenssia, pH-herkkiä merkkiaineita ja artikkeleita, joissa on sovellettu kyseisiä merkkiaineita. Kirjallisen tutkimuksen perusteella tutkimusryhmälle parhaiten soveltuisivat C-SNARF-4, BCECF-AM, EYFP ja EGFP merkkiaineet. Kyseiset merkkiaineet yhdessä kattavat solun sisäisen pH:n 4,5-8,2. Näiden lisäksi löytyi myös muita pH-alueelle soveltuvia merkkiaineita mutta merkkiaineita ei ole sovellettu solun sisäisesti.
Tässä työssä käydään läpi fluoresenssin teoriaa, fluoresoivien merkkiaineiden ja niiden rakennetta sekä toimintaa. Työssä selvitetään myös tarkemmin pH-herkkien merkkiaineiden ominaisuuksia ja käydään läpi aiempia sovelluksia. Teoriaosassa perehdytään aluksi fluoresenssin prosessiin, fluoresenssin elinaikaan ja miten ympäristö vaikuttaa fluoresenssiin. Fluoresoivissa merkkiaineissa käydään ensin läpi yleisesti merkkiaineiden ominaisuuksia ja syvennytään sitten työn kannalta olennaisten merkkiaineiden rakenteisiin. Lopuksi käydään läpi autofluoresenssia, pH-herkkiä merkkiaineita ja artikkeleita, joissa on sovellettu kyseisiä merkkiaineita. Kirjallisen tutkimuksen perusteella tutkimusryhmälle parhaiten soveltuisivat C-SNARF-4, BCECF-AM, EYFP ja EGFP merkkiaineet. Kyseiset merkkiaineet yhdessä kattavat solun sisäisen pH:n 4,5-8,2. Näiden lisäksi löytyi myös muita pH-alueelle soveltuvia merkkiaineita mutta merkkiaineita ei ole sovellettu solun sisäisesti.
Kokoelmat
- Kandidaatintutkielmat [8798]