Vesikkeli - elävä solu –systeemien tutkiminen fluoresenssinelinaikamikroskopialla
Paronen, Petra (2016)
Paronen, Petra
2016
Materiaalitekniikan koulutusohjelma
Teknisten tieteiden tiedekunta - Faculty of Engineering Sciences
This publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.
Hyväksymispäivämäärä
2016-03-09
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:tty-201602293582
https://urn.fi/URN:NBN:fi:tty-201602293582
Tiivistelmä
Tämä diplomityö tehtiin Tampereen teknillisen yliopiston kemian ja biotekniikan laitokselle. Työn tavoitteena oli kehittää menetelmä fluoresoivalla väriaineella leimattujen vesikkelien ja solujen vuorovaikutusten tarkasteluun fluoresenssinelinaikamikroskoopilla. Diplomityö on osa Helsingin yliopiston farmasianlaitoksen projektia, jossa tutkitaan vesikkelien käyttöä lääkeainekuljetuksessa. Vesikkelien leimaamiseen käytettiin fluoresoivia väriaineita: membraanivärejä DiO ja DiI sekä pH-herkkää Oregon Greenillä konjugoitua syöpälääke Paklitakselia. Vesikkelit kuvattiin hydrogeelissä, jotta ne pysyisivät paikallaan mittauksen aikana. Solumittaukset tehtiin kasvatusmediumissa, jotta solujen ja vesikkelien vuorovaikutus tapahtuisi mahdollisimman esteettömästi. Työssä tutkittiin myös vesikkelien diffuusiota hydrogeelissä ja väriaineiden DiI ja Oregon Green välistä energiansiirtoa sekä filttereiden käyttöä DiI:n ja Oregon Greenin emissioiden erottamiseksi. Solumittauksissa väriaineilla leimattuja vesikkeleitä inkuboitiin solujen kanssa vuorokauden ajan, minkä jälkeen näytettä tarkasteltiin fluoresenssinelinaikamikroskoopilla. Vesikkeleissä ollut fluoresoiva väriaine oli inkuboinnin aikana kerääntynyt solujen ulkokalvolle, mutta fluoresenssia ei ollut havaittavissa solujen sisällä. Vesikkelit olivat joko jääneet solujen ulkokalvolle tai solut olivat poistaneet fluoresoivan aineen sisältään inkuboinnin aikana. PTX-OG:lla leimattuja vesikkeleitä pipetoitiin myös suoraan solujen päälle näytteen ollessa mikroskoopissa, mutta myös tällöin fluoresoivat aineet jäivät oletettavasti solun pinnalle, koska muutosta fluoresenssin elinajassa ei havaittu. Elävien solujen tutkiminen käytössä olleella laitteistolla osoittautui haasteelliseksi. Käytetyllä menetelmällä on kuitenkin mahdollista tutkia ympäristön vaikutusta fluoresenssin elinaikaan elävissä systeemeissä.