Efflux-geenien ilmentyminen hiPS-soluista erilaistetuissa sarveiskalvon epiteelisoluissa
Haukipää, Mia (2014)
2014
Lääketieteen lisensiaatin tutkinto-ohjelma - Licentiate's Degree Programme in Medicine
Lääketieteen yksikkö - School of Medicine
This publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.
Hyväksymispäivämäärä
2014-09-22
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:uta-201409232161
https://urn.fi/URN:NBN:fi:uta-201409232161
Tiivistelmä
Sarveiskalvon epiteelin on opittu ilmentävän efflux-proteiineja MRP1-6 (multiresistance protein 1-6), P-gp (P-glykoproteiini) ja BCRP (breast cancer resistance protein), jotka pumppaavat substraattejaan ulos solusta. Tämän tiedon perusteella on voitu tutkia erilaisia solulinjoja, joilla voitaisiin korvata ihmisen sarveiskalvon epiteeliä tai luoda ihmisen sarveiskalvon epiteeliä vastaavia kudosmalleja. hiPS-soluja (human induced pluripotent stem cell) voidaan ohjelmoida ihmisen omista soluista ja erilaistaa sarveiskalvon kaltaisiksi soluiksi.
Tässä tutkimuksessa selvitettiin MRP1-6-, P-gp- ja BCRP-efflux-proteiinien ilmentymistä mRNA-tasolla natiivissa ihmisen sarveiskalvon epiteelissä (CE), immortalisoidussa HCE-solulinjassa, erilaistumattomassa hiPS-solulinjassa ja alkion kantasolulinjassa (hESC), sekä hiPS- ja hES-soluista erilaistetuissa sarveiskalvon epiteeleissä (hiPSC-CE ja hESC-CE). Tutkimuksessa käytettiin reaaliaikaista qPCR-menetelmää ja ilmentymistasot analysoitiin Ct-arvoista 2-ddCt-menetelmällä. Solulinjojen efflux-geenien ilmentymistasoja verrattiin natiiviin ihmisen sarveiskalvon epiteeliin.
Kaikki tutkittavat efflux-geenit ilmenivät sekä CE:ssä, HCE:ssä, hiPSC-, hiPSC-CE- ja hESC-CE-solulinjoissa. hiPSC-CE:n ilmentymistasot vaihtelivat joidenkin geenien kohdalla suurestikin CE:stä. hiPSC-CE muistutti kuitenkin paremmin CE:tä kuin kaupallinen HCE-solulinja. Tämän tutkimuksen perusteella hiPSC-CE-solulinja ei sovi vielä kliiniseen käyttöön, vaan se tarvitsee jatkotutkimusta.
Tässä tutkimuksessa selvitettiin MRP1-6-, P-gp- ja BCRP-efflux-proteiinien ilmentymistä mRNA-tasolla natiivissa ihmisen sarveiskalvon epiteelissä (CE), immortalisoidussa HCE-solulinjassa, erilaistumattomassa hiPS-solulinjassa ja alkion kantasolulinjassa (hESC), sekä hiPS- ja hES-soluista erilaistetuissa sarveiskalvon epiteeleissä (hiPSC-CE ja hESC-CE). Tutkimuksessa käytettiin reaaliaikaista qPCR-menetelmää ja ilmentymistasot analysoitiin Ct-arvoista 2-ddCt-menetelmällä. Solulinjojen efflux-geenien ilmentymistasoja verrattiin natiiviin ihmisen sarveiskalvon epiteeliin.
Kaikki tutkittavat efflux-geenit ilmenivät sekä CE:ssä, HCE:ssä, hiPSC-, hiPSC-CE- ja hESC-CE-solulinjoissa. hiPSC-CE:n ilmentymistasot vaihtelivat joidenkin geenien kohdalla suurestikin CE:stä. hiPSC-CE muistutti kuitenkin paremmin CE:tä kuin kaupallinen HCE-solulinja. Tämän tutkimuksen perusteella hiPSC-CE-solulinja ei sovi vielä kliiniseen käyttöön, vaan se tarvitsee jatkotutkimusta.