ADAM19-disintegriini-metalloproteaasin sytosoliset SH3-vuorovaikutukset
YRITYS, MILJAMARTTA (2008)
Tässä tietueessa ei ole kokotekstiä saatavilla Treposta, ainoastaan metadata.
YRITYS, MILJAMARTTA
2008
Biokemia - Biochemistry
Lääketieteellinen tiedekunta - Faculty of Medicine
Hyväksymispäivämäärä
2008-02-28Tiivistelmä
Tutkimuksen tausta: ADAM-proteiinit (a disintegrin and metalloprotease) ovat kalvoproteiineja, jotka koostuvat useista toiminnallisista domeeneista. ADAM-proteiinien tiedetään osallistuvan lukuisiin merkittäviin biologisiin prosesseihin. Disintegriinidomeeni voi välittää soluadheesiota sitoutumalla integriineihin ja metalloproteaasidomeeni voi puolestaan leikata valikoivasti kalvoproteiinien ektodomeeneja irti vapauttaen näin esimerkiksi kasvutekijöitä aktiivisiksi muodoiksi. ADAM-proteiinien sytosolinen häntä sisältää useita mahdollisia fosforylaatiokohtia sekä adaptori- ja signalointiproteiinien sitoutumismotiiveja, minkä vuoksi sen arvellaan osallistuvan ADAMien toiminnan ja/tai lokalisaation säätelyyn. ADAM19 on useissa kudoksissa ilmentyvä aktiivinen metalloproteaasi. Se osallistuu sydämen ja hermoston kehitykseen ja sen toiminta on liitetty mm. tulehdusreaktioihin ja syövän kehitykseen. ADAM19:n toimintaa säädellään fysiologisesti, mutta sen toiminnan ja säätelyn molekulaarisista mekanismeista tiedetään kuitenkin hyvin vähän. Tämän tutkimuksen päätavoitteena oli selvittää ihmisen ADAM19:n sytosolisen osan mahdollista säätelyroolia tunnistamalla siihen sitoutuvia Src-homology-3 (SH3) -proteiineja sekä karakteroimalla tunnistettuja ADAM19-SH3-vuorovaikutuksia yksityiskohtaisemmin.
Tutkimusmenetelmät: Ihmisen ADAM19:n sytosolista häntää ja sen osia vastaavat GST-fuusioproteiinit tuotettiin yhdistelmä-DNA-tekniikalla. Faagidisplay-menetelmällä seulottiin ADAM19:n sytosoliseen häntään sitoutuvia SH3-domeeneja. Tunnistettuja ADAM19-SH3-vuorovaikutuksia tarkasteltiin yksityiskohtaisemmin peptidiarray-menetelmän avulla, jossa tutkittiin GST-fuusioproteiineina tuotettujen SH3-domeenien sitoutumista selluloosafiltterille immobilisoituihin ADAM19:n sytosolisen hännän proliiniklustereihin.
Tutkimustulokset: Useiden SH3-domeenien havaittiin sitoutuvan ADAM19:n sytosolisen hännän proliiniklustereihin in vitro. Selkeimmin vuorovaikutus havaittiin ADAM19:n sytosolisen hännän ja FISH-, nephrocystin-, p47-phox- sekä PRAX-1 -proteiinien SH3-domeenien välillä. Myös useiden muiden SH-domeenien, kuten sorting nexin 30, Eps8L1, TOCA1, homology to PRAX sekä Vav1, tunnistettiin sitoutuvan ADAM19:n sytosolisen hännän proliiniklustereihin.
Johtopäätökset: ADAM19:n sytosolisen hännän proliiniklusterit välittävät SH3-vuorovaikutuksia in vitro, minkä vuoksi on perusteltua olettaa, että sytosolinen häntä voi osallistua ADAM19:n lokalisaation ja/tai toiminnan säätelyyn. Tutkimuksessa havaittujen vuorovaikutusten perusteella suunnitellaan kohdennettuja lisätutkimuksia, joiden avulla saadaan lisätietoa ADAM19:n toiminnan säätelystä ja prosesseista, joihin ADAM19 osallistuu.
Tutkimusmenetelmät: Ihmisen ADAM19:n sytosolista häntää ja sen osia vastaavat GST-fuusioproteiinit tuotettiin yhdistelmä-DNA-tekniikalla. Faagidisplay-menetelmällä seulottiin ADAM19:n sytosoliseen häntään sitoutuvia SH3-domeeneja. Tunnistettuja ADAM19-SH3-vuorovaikutuksia tarkasteltiin yksityiskohtaisemmin peptidiarray-menetelmän avulla, jossa tutkittiin GST-fuusioproteiineina tuotettujen SH3-domeenien sitoutumista selluloosafiltterille immobilisoituihin ADAM19:n sytosolisen hännän proliiniklustereihin.
Tutkimustulokset: Useiden SH3-domeenien havaittiin sitoutuvan ADAM19:n sytosolisen hännän proliiniklustereihin in vitro. Selkeimmin vuorovaikutus havaittiin ADAM19:n sytosolisen hännän ja FISH-, nephrocystin-, p47-phox- sekä PRAX-1 -proteiinien SH3-domeenien välillä. Myös useiden muiden SH-domeenien, kuten sorting nexin 30, Eps8L1, TOCA1, homology to PRAX sekä Vav1, tunnistettiin sitoutuvan ADAM19:n sytosolisen hännän proliiniklustereihin.
Johtopäätökset: ADAM19:n sytosolisen hännän proliiniklusterit välittävät SH3-vuorovaikutuksia in vitro, minkä vuoksi on perusteltua olettaa, että sytosolinen häntä voi osallistua ADAM19:n lokalisaation ja/tai toiminnan säätelyyn. Tutkimuksessa havaittujen vuorovaikutusten perusteella suunnitellaan kohdennettuja lisätutkimuksia, joiden avulla saadaan lisätietoa ADAM19:n toiminnan säätelystä ja prosesseista, joihin ADAM19 osallistuu.