Vehnän gliadiinin haittavaikutusten estäminen elävien probioottibakteerien avulla suolen epiteelisoluviljelmissä
BLOMQVIST, TERESA (2007)
2007
Biokemia - Biochemistry
Lääketieteellinen tiedekunta - Faculty of Medicine
This publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.
Hyväksymispäivämäärä
2007-07-16
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/urn:nbn:fi:uta-1-17151
https://urn.fi/urn:nbn:fi:uta-1-17151
Tiivistelmä
Tutkimuksen tausta ja tavoitteet
Vehnän gliadiini aiheuttaa keliakiapotilailla hankalia suolisto-oireita, joiden ainoa hoitokeino on tiukka gluteeniton dieetti. Tämän tutkimuksen tavoitteena oli selvittää voidaanko probiooteilla Lactobacillus fermentum ja Bifidobacterium lactis estää vehnän gliadiinin aiheuttamia keliakiahaittavaikutuksia suolen epiteelisoluviljelmissä. Tavoitteena oli myös pystyttää ja testata sopivia menetelmiä selvitystyötä varten.
Tutkimusmenetelmät
Solulinjana käytettiin paksusuolen epiteelisolulinjaa Caco-2. Apoptoottisten solujen osuutta mitattiin fluoresenssiin perustuvalla jaottelulla (Fluorescence Activated Cell Sorting, FACS). Epiteelisolukerroksen läpäisevyyttä tutkittiin transepiteelistä resistanssia (TER) ja epiteelin läpäisevän fluoresoivan väriaineen virtausta (FITC Dextran Flux) mittaamalla. Aktiini värjättiin fluoresoivalla falloidiinilla solutukirangan muutosten havaitsemiseksi. Tiivisliitosmorfologian muutoksia tutkittiin tiivisliitosproteiineja värjäämällä.
Tutkimustulokset
Caco-2 -solulinjalla tehdyillä kokeilla havaittiin, että probiootti B. lactis esti määrästä riippuvaisesti gliadiinin aiheuttaman transepiteelisen resistanssin heikkenemisen. Sama bakteeri esti myös gliadiinin aiheuttamaa aktiiniröyhelöiden muodostumista Caco-2 -solulauttojen reunoille. Myös L. fermentum -bakteerilla oli estäviä vaikutuksia aktiiniröyhelöiden syntyyn. Bakteereilla näytti olevan myös suojaavia vaikutuksia tiivisliitosproteiini ZO1:n ilmentymisen muutoksiin Caco-2 -soluilla.
Tulosten tarkastelu
Osa testatuista menetelmistä ei soveltunut bakteerien suojavaikutusten tutkimiseen. Toimivilla menetelmillä saatiin kuitenkin selville, että erityisesti B. lactis suojaa gliadiinin haittavaikutuksilta soluviljelyolosuhteissa määrästä riippuvaisesti.
Johtopäätökset
Elävä probiootti B. lactis suojaa keliakiassa toksiselta vehnän gliadiinilta, joten sitä voitaisiin mahdollisesti käyttää apuna keliaakikoiden tällä hetkellä niukan ruokavalion laajentamiseksi.
Asiasanat: keliakia, Caco-2, Lactobacillus fermentum, Bifidobacterium lactis, muutokset epiteelisoluissa
Vehnän gliadiini aiheuttaa keliakiapotilailla hankalia suolisto-oireita, joiden ainoa hoitokeino on tiukka gluteeniton dieetti. Tämän tutkimuksen tavoitteena oli selvittää voidaanko probiooteilla Lactobacillus fermentum ja Bifidobacterium lactis estää vehnän gliadiinin aiheuttamia keliakiahaittavaikutuksia suolen epiteelisoluviljelmissä. Tavoitteena oli myös pystyttää ja testata sopivia menetelmiä selvitystyötä varten.
Tutkimusmenetelmät
Solulinjana käytettiin paksusuolen epiteelisolulinjaa Caco-2. Apoptoottisten solujen osuutta mitattiin fluoresenssiin perustuvalla jaottelulla (Fluorescence Activated Cell Sorting, FACS). Epiteelisolukerroksen läpäisevyyttä tutkittiin transepiteelistä resistanssia (TER) ja epiteelin läpäisevän fluoresoivan väriaineen virtausta (FITC Dextran Flux) mittaamalla. Aktiini värjättiin fluoresoivalla falloidiinilla solutukirangan muutosten havaitsemiseksi. Tiivisliitosmorfologian muutoksia tutkittiin tiivisliitosproteiineja värjäämällä.
Tutkimustulokset
Caco-2 -solulinjalla tehdyillä kokeilla havaittiin, että probiootti B. lactis esti määrästä riippuvaisesti gliadiinin aiheuttaman transepiteelisen resistanssin heikkenemisen. Sama bakteeri esti myös gliadiinin aiheuttamaa aktiiniröyhelöiden muodostumista Caco-2 -solulauttojen reunoille. Myös L. fermentum -bakteerilla oli estäviä vaikutuksia aktiiniröyhelöiden syntyyn. Bakteereilla näytti olevan myös suojaavia vaikutuksia tiivisliitosproteiini ZO1:n ilmentymisen muutoksiin Caco-2 -soluilla.
Tulosten tarkastelu
Osa testatuista menetelmistä ei soveltunut bakteerien suojavaikutusten tutkimiseen. Toimivilla menetelmillä saatiin kuitenkin selville, että erityisesti B. lactis suojaa gliadiinin haittavaikutuksilta soluviljelyolosuhteissa määrästä riippuvaisesti.
Johtopäätökset
Elävä probiootti B. lactis suojaa keliakiassa toksiselta vehnän gliadiinilta, joten sitä voitaisiin mahdollisesti käyttää apuna keliaakikoiden tällä hetkellä niukan ruokavalion laajentamiseksi.
Asiasanat: keliakia, Caco-2, Lactobacillus fermentum, Bifidobacterium lactis, muutokset epiteelisoluissa