TESTING THE COMPATIBILITY OF MATRIGEL, PURAMATRIX AND PURIFIED BASEMENT MEMBRANE PROTEINS IN SUBCULTURING RPE CELLS DIFFERENTIATED FROM HUMAN EMBRYONIC STEM CELLS
MUSTALAHTI, RISTO (2012)
2012
Lääketiede - Medicine
Lääketieteen yksikkö - School of Medicine
This publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.
Hyväksymispäivämäärä
2012-12-18
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/urn:nbn:fi:uta-1-23283
https://urn.fi/urn:nbn:fi:uta-1-23283
Tiivistelmä
Vain osa ihmisen alkion kantasoluista voidaan erilaistaa retinan pigmenttiepiteelisoluiksi (RPE) nykyisillä erilaistusmenetelmillä. Tämän tutkimuksen tarkoituksena on isoloida erilaistuneet RPE solut ja saada ne kasvamaan kompaktina yksisolukerroksena. Tutkimuksessa testattiin eri kasvatusalustojen sopivuutta RPE solujen kasvun tukemiseksi ja erilaistumisen kontrolloimiseksi.
Tutkimukset suoritettiin kantasolututkimuskeskus Regean solulinjalla 023/08, joka on lähtöisin implantaatiovaihetta edeltävistä ylijäämä- ja huonolaatuisista alkioista. Solut on kasvatettu ilman seerumia, hyvän tuotantotavan (GMP) saavuttamiseksi. Tutkimuksessa testattiin kolme kasvatusalustaa. Ensimmäinen sisälsi seoksen solun tyvikalvon proteiineja; kollageeni neljää, laminiinia, fibronektiiniä ja nidogeeniä. Toinen ja kolmas alusta olivat kaupalliset Matrigel ja Puramatrix. Kasvua seurattiin valomikroskopian ja immunfluorenssimikroskopian keinoin. Monia solujen erottelutekniikoita kokeiltiin.
Kolmen alustan vertailussa Puramatrix oli selvästi kahta muuta heikompi. Matrigel vauhditti hyvin solujen kasvua, mutta erilaistumista tapahtui myös muunlaisten solujen suuntaan. Tyvikalvoproteiinien seoksella kasvu ei ollut aivan yhtä nopeaa, mutta erilasituminen RPE solujen kaltaisiksi soluiksi oli toivotumpaa tällä alustalla.
Suurimmaksi ongelmaksi koituivat vaikeudet solujen erottelussa riittävän hellässä ja tehokkaassa erottelussa, mikään tutkituista keinoista ei tuottanut tyydyttäviä tuloksia. Paras kasvatusalusta tässä tutkimuksessa oli tyvikalvoproteiinien seos. Immunofluoresenssimikroskopialla määritettynä tällä kasvatusalustalla kasvatetut solut olivat eniten RPE solujen kaltaisia. Kunhan vaikeudet solujen erottelussa ja kasvatusmaljojen pinnaoittamisessa saadaan ratkaistua, olen luottavainen, että RPE solujen kasvattaminen kompaktina yksisolukerroksena on mahdollista. Tämä tutkimus antaa arvokasta tietoa jatkotutkimuksille, joissa tähdätään kohti yksityiskohtaisempaa numerodataa.
Asiasanat: retina, silmä, kasvatusalusta, kantasolu, pigmenttiepiteeli
Tutkimukset suoritettiin kantasolututkimuskeskus Regean solulinjalla 023/08, joka on lähtöisin implantaatiovaihetta edeltävistä ylijäämä- ja huonolaatuisista alkioista. Solut on kasvatettu ilman seerumia, hyvän tuotantotavan (GMP) saavuttamiseksi. Tutkimuksessa testattiin kolme kasvatusalustaa. Ensimmäinen sisälsi seoksen solun tyvikalvon proteiineja; kollageeni neljää, laminiinia, fibronektiiniä ja nidogeeniä. Toinen ja kolmas alusta olivat kaupalliset Matrigel ja Puramatrix. Kasvua seurattiin valomikroskopian ja immunfluorenssimikroskopian keinoin. Monia solujen erottelutekniikoita kokeiltiin.
Kolmen alustan vertailussa Puramatrix oli selvästi kahta muuta heikompi. Matrigel vauhditti hyvin solujen kasvua, mutta erilaistumista tapahtui myös muunlaisten solujen suuntaan. Tyvikalvoproteiinien seoksella kasvu ei ollut aivan yhtä nopeaa, mutta erilasituminen RPE solujen kaltaisiksi soluiksi oli toivotumpaa tällä alustalla.
Suurimmaksi ongelmaksi koituivat vaikeudet solujen erottelussa riittävän hellässä ja tehokkaassa erottelussa, mikään tutkituista keinoista ei tuottanut tyydyttäviä tuloksia. Paras kasvatusalusta tässä tutkimuksessa oli tyvikalvoproteiinien seos. Immunofluoresenssimikroskopialla määritettynä tällä kasvatusalustalla kasvatetut solut olivat eniten RPE solujen kaltaisia. Kunhan vaikeudet solujen erottelussa ja kasvatusmaljojen pinnaoittamisessa saadaan ratkaistua, olen luottavainen, että RPE solujen kasvattaminen kompaktina yksisolukerroksena on mahdollista. Tämä tutkimus antaa arvokasta tietoa jatkotutkimuksille, joissa tähdätään kohti yksityiskohtaisempaa numerodataa.
Asiasanat: retina, silmä, kasvatusalusta, kantasolu, pigmenttiepiteeli