Investigation of migration and spreading of cells expressing modified talin1 forms
Viheriälä, Taina (2014)
Viheriälä, Taina
2014
Bioteknologian tutkinto-ohjelma - Degree Programme in Biotechnology
BioMediTech - BioMediTech
This publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.
Hyväksymispäivämäärä
2014-09-29
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:uta-201410062186
https://urn.fi/URN:NBN:fi:uta-201410062186
Tiivistelmä
Fokaaliadheesiot (FA) ovat suuria, useiden proteiinien muodostamia komplekseja. Solut käyttävät adheesioita vuorovaikuttaakseen ympäristönsä sekä muiden solujen kanssa ja niiden avulla solut pystyvät mm. liikkumaan. Yksi tärkeistä proteiineista, joka osallistuu adheesioiden muodostamiseen ja ylläpitämiseen on taliini. Taliini muodostaa yhteyden solun pinnalla olevan integriinin ja solun sisällä olevan aktiinitukirangan välille. Tämä mahdollistaa solun vasteen ulkopuolella tapahtuvaan mekaaniseen muutokseen. Useat FA-proteiinit on tunnettu jo pitkään, mutta niiden ominaisuuksista ja tehtävistä soluissa on vielä puutteellisesti tietoa. Tässä työssä tutkittiin erilaisten lyhennettyjen taliini1 -muotojen vaikutusta solujen migraatioon ja leviämiseen. Tätä ennen täytyi kuitenkin optimoida ja pystyttää laitteisto migraatiokoetta varten. Optimointivaiheessa käytettiin kolmea eri solulinjaa; villityypin hiiren alkion fibroblasteja (WT MEF) sekä soluja, joista on poistettu taliini1:ä tai vinkuliinia koodaava geeni. Varsinaisessa migraatio- ja leviämiskokeissa käytettiin hiiren alkion fibroblasti -soluja, jotka eivät ekspressoi taliini1:ä, joten niihin pystyttiin transfektoimaan haluttua taliini1 -plasmidia; täyspitkää taliin1:ä (FL Tal1) tai neljää erilaista lyhennettyä taliini1 muotoa. Kaikki taliiniptoteiinit ekspressoitiin fuusioituna punaiseen fluoresoivaan proteiiniin (mCherry), joten fluoresenssimikroskoopilla oli mahdollista saada näkyviin, mitkä solut olivat alkaneet ekspressoimaan transfektoitua plasmidia. Mikroskooppikuvia analysoimalla saatiin varsinaisesti määritettyä ja laskettua kyseisten plasmidien vaikutusta migraatioon ja solujen leviämiseen. Solujen kasvualustana käytettiin peitinlaseja päällystettynä fibronektiinillä, jotta saatiin luotua tunnettu ja hallittu alusta. Kokeiden avulla pystyttiin havaitsemaan kuinka FL Tal1:ä ekspressoivat solut migroituvat ja leviävät hieman nopeammin kuin muita taliini1 muotoja ekspressoivat solut. Minitaliini4 -soluilla puolestaan havaittiin olevan hitain migroituminen ja heikoin leviäminen muihin muokattuihin taliini1 proteiineihin verrattuna. Kokeissa määritetyt ja optimoidut laitteistot sekä olosuhteet antavat hyvän alustan jatkotutkimuksiin fokaaliadheesioproteiinien parissa.